作者:夏加增，马涛，赵伟，郑南翔
【摘要】 目的 研究胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达及其与胃癌淋巴结转移的关系。方法 用免疫组化方法检测胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达情况，并分析其表达与胃癌淋巴结转移的关系。结果 60例胃癌组织中，CD44v6、COX-2和MMP-2表达阳性率分别为61.7%（37/60），55.0%(33/60)和73.3%(44/60)。胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达与淋巴结转移密切相关。结论 胃癌组织中CD44v6、COX-2、MMP-2的表达与胃癌淋巴结转移密切相关，提示CD44v6、COX-2、MMP-2可作为判断胃癌预后的指标。
【关键词】 胃癌；CD44v6；环氧合酶-2；基质金属蛋白酶；淋巴结转移；免疫组织化学
Expression of CD44v6，COX-2，MMP-2 in gastric carcinomas and their relationship to lymph node metastasis
【Abstract】 Objective To study the expression of CD44v6，COX-2 and MMP-2 in gastric carcinomas and there relationship to lymph node metastasis.Methods The expression of CD44v6，COX-2 and MMP-2 in gastric carcinomas were detected by immunohistochemical method，and their relationship with lymph node metastasis was analyzed.Results The positive rates for the expression of CD44v6，COX-2 and MMP-2 in 60 gastric cancer tissues were 61.7%（37/60），55.0%(33/60)and 73.3%(44/60)，respectively.The expression of CD44v6，COX-2 and MMP-2 were significantly related with lymph node metastasis.Conclusion The expression of CD44v6，COX-2 and MMP-2 were significantly related with lymph node metastasis in gastric carcinomas，showing that they can be used as indicators to predict prognosis of gastric carcinomas.
【Key words】 gastric carcinoma;CD44v6;COX-2;MMP-2;lymph node metastasis; immunohistochemistry
淋巴结转移和复发是影响胃癌患者预后的重要因素之一。淋巴结转移是一个复杂的过程，CD44v6可参与癌细胞与基质的黏附作用及淋巴细胞归巢，从而有利于癌细胞的扩散与转移。环氧合酶-2（COX-2）的过度表达可上调基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的表达，并增加其活性，从而促进肿瘤浸润和转移。本文采用免疫组化方法对60例胃癌术后淋巴结转移进行检测，并分析胃癌组织中CD44v6、COX-2和MMP-2表达与胃癌淋巴结转移的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象 选择60例手术切除并经病理证实的胃癌标本，男39例，女21例，年龄32～81岁，平均58岁。其中早期胃癌8例，进展期胃癌52例。所有患者均行根治性胃癌切除，术前未接受放疗和化疗。病理标本均按《中国胃癌诊治规范》和日本胃癌处理规范进行处理。胃癌组织及淋巴结标本均经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片厚度5μm，进行常规HE染色和免疫组化染色。
1.2 免疫组化检测 采用ABC法免疫组化染色，ABC试剂盒购自美国Vector公司，组织切片经二甲苯脱蜡、酒精水化后，浸入3ml/L的过氧化氢中30min，以阻断内源性过氧化酶的活性，然后将玻片置入0.01mol/L，pH 6.0的柠檬酸缓冲液中加热30min，以充分暴露抗原，分别滴加鼠抗人CD44v6单抗（北京中山生物技术公司）、兔抗人COX-2多抗（北京中山生物技术公司）和鼠抗人MMP-2单抗（福州迈新生物技术公司），4℃孵育过夜，再滴加第二抗体，室温下反应20min，过氧化酶反应15min。随后经二氨基联苯胺四盐酸盐显色5min，再经苏木素复染，脱水、透明、封片。每次染色均以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。
1.3 方法 每张切片分别取上、下、左、右和中心共5个区域进行细胞计数，每个区计数200个肿瘤细胞，共计数1000个肿瘤细胞，计算染色细胞所占比例。CD44v6定位于胃癌细胞胞膜，COX-2和MMP-2定位于胃癌细胞胞浆，以细胞内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞所占比例<10%为阴性，阳性细胞≥10%为阳性。