【关键词】 肝门部胆管癌;p27蛋白;免疫组化
Expression of p27 in hilar cholangiocarcinoma and its clinical significance
【Abstract】 Objective To discuss the expression of p27 in hilar cholangiocarcinoma and explore its clinical significance.Methods Forty-four hilar cholangiocarcinoma samples and normal bile ducts tissues were collected in General Hospital of PLA from 1996 to 2000.The expression of p27 was determined by immuneohistochemical method.Results The positive rate of p27 were 77.2% in cancerous tissues，but 100% in the control group.Meanwhile，p27 expression had a significant correlation with differentiation of hilar cholangiocarcinoma，lymph node metastases and perineural invasion.The survival curve of the group with low or absent p27 expression was significantly lower than that of the group with high p27 expression.Conclusion Our results suggest that aberrant expression of p27 maybe associated with the incidence and development of hilar cholangiocarcinoma and can be regarded as prognostic markers.
【Key words】 hilar cholangiocarcinoma;p27;immunohistochemistry
p27蛋白是一个重要抑癌基因，其表达水平降低减低了它对CDK或cyclin/CDK复合物活性的抑制效应，导致CDK的活化效应递增，使细胞能够完成细胞周期G1～S期的重要转换，驱动细胞周期的运行，而使细胞增殖与分裂过快、过多乃至肿瘤形成。目前已在多种肿瘤中予以报道。但是，其在肝门部胆管癌中的表达及其作用，至今国内外报道不多。本试验通过对44例肝门部胆管癌中p27的表达研究，探讨其生物学意义和临床意义。
1 材料与方法
1.1 材料 选取我院1996～2000年经手术切除、术前未行放化疗、有明确病理结果及有详细随访资料的肝门部胆管癌标本44例，用中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。其中男29例，女15例，中位年龄53岁(17～73岁)。按临床分期，Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ期0例，Ⅳ期29例，其中Ⅳa期27例，Ⅳb期2例。其中高分化腺癌13例，中分化腺癌17例，低分化腺癌9例。对照组标本选取行根治性切除的胆管癌标本的远端切缘的正常胆管组织。
1.2 方法 鼠抗人p27蛋白单克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司，工作浓度为1∶20。抗兔/鼠通用型免疫组化检测试剂盒购于上海基因有限公司。免疫组化染色采用两步法（做高温高压抗原修复）。用已知p27蛋白阳性的正常扁桃体组织（由北京中杉金桥生物技术有限公司提供）作为阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照。
1.3 结果判断标准 参考Michelangelo Fiorentino［1］p27蛋白以细胞核或胞核伴胞质内出现棕黄色颗粒为阳性结果，每张切片选5个高倍视野进行细胞计数，按阳性细胞数占同类细胞的百分比。p27的表达分为，高表达组：阳性细胞≥50%；低表达组：阳性细胞＜50%；及阴性表达组，无阳性细胞染色。
1.4 统计学方法 采用四格表χ2检验。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率的比较采用Log-rank检验，以P＜0.05为差异有显著性。Kaplan-Meier曲线由Stata自动生成。