1.3.3 免疫荧光试验(IFAT) 采用间接法。感染细胞培养至第5天，将细胞吹下，滴于玻片，常规染色制片，用OLYMPUS荧光显微镜检查。
1.3.4 细胞酶免疫(C-EIA)试验 感染细胞培养于聚苯乙烯塑料板，至第5天，常规固定，加各种结合物及样品，用目测法判定结果。方法详见文献[1]。
1.3.5 血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验 采用常规微量法。用0.5%鸽血球测定。血清用白陶土和鸽血球常规处理，抗原为4U。以50%的血球凝集被抑制为终点。
1.3.6 中和试验 采用固定血清稀释病毒法。用3～4周龄小白鼠测定，观察14D，按REED-MUENCH法计算中和指数。
2 结果
2.1 病毒分离
在上述9县市共采获伊蚊属雌性成蚊16种19367只作病毒分离，从白纹伊蚊、剌扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊中分离出病毒7株(表1)。所获毒株均能引起乳小白鼠或3周龄小白鼠发病和死亡，亦能导致C6/36细胞出现病变，并具有滤过性。
表1 从云南省4种伊蚊中分离乙脑病毒
TABLE 1 ISOLATION OF JAPANESE ENCEPHALITIS VIRUS FROM FOUR SPECIES OF AEDES MOSQUITOES COLLECTED IN YUNNAN PROVINCE
蚊种
SPECIES OF MOSQ. 采集地点
COLLECTING SITE 蚊虫只数
NO.OF MOSQ. 批数
POOLS OF MOSQ. 阳性批数
NO.OF POSITIVE POOLS 病毒号及阳性蚊采集县
VIRUS CODE AND COLLECTING COUNTIES OF POSITIVE MOSQ.
白纹伊蚊
AEDES ALBOPICTUS 竹林BAMBOO FOREST 6491 185 2 B88-81景洪JINGHONG
D266瑞丽RUILI
剌扰伊蚊
AEDES VEXANS 竹林BAMBOO FOREST
畜圈STABLE 1194
411 38
12 2
0 B24-5景洪JINGHONG
B86-17景洪JINGHONG
窄翅伊蚊
AEDES LINEATOPENNIS 竹林BAMBOO FOREST
畜圈STABLE 76
696 3
20 1
1 D107盈江YINGJIANG
B88-17景洪JINGHONG
阿萨姆伊蚊
AEDES ASSAMENSIS 竹林BAMBOO FOREST 103 4 1 L99耿马GENGMA
其它12种伊蚊(伪白纹伊蚊 AE. PSEUDALBOPICTUS、圆斑伊蚊 AE. ANNANDALEI、台湾伊蚊 AE. FORMOSENSIS、显著伊蚊 AE. PROMINENS、股点伊蚊模拟亚种 AE. GARDNERII IMITATOR、白雪伊蚊 AE. NIVEUS、白盏伊蚊 AE. ALBOSCUTELLATUS、环胫伊蚊 AE. DESMOTES、侧白伊蚊 AE. ALBOLATERALIS、白带伊蚊米基尔亚种 AE. ALBOTAENIATUS MIKIRANUS、爱氏伊蚊 AE. ELDRIDGEI和亚白纹伊蚊 AE. SUBALBOPICTUS)共10396只蚊虫的病毒分离均为阴性。
2.2 病毒鉴定
2.2.1 免疫荧光试验 分离到的7株病毒均与乙脑单克隆抗体或乙脑免疫血清出现特异性荧光反应(表2)。
2.2.2 细胞酶免疫试验 B88-81、B86-17、B88-21和L99株均与乙脑单克隆抗体或乙脑免疫血清产生特异性酶免疫反应(表2)。
2.2.3 血凝特性 在PH6.4条件下，7株病毒的鼠脑蔗糖丙酮抗原均能与鸽血球出现凝集，滴度为1∶160～1∶5120之间(表2)。