1990年Williams和Welsh等[27、28]运用随机扩增寻找多态性DNA片段作为分子标记, 并将此法命名为RAPD法(Random Amplified Polymorphism DNA,随机扩增多态性DNA) 。尽管RAPD技术诞生时间不长,但由于其独到的DNA 多态性及快速和比PCR更简便等特点,使它成为基因组遗传图谱构建;基因定位及进化生态学研究中最为重要手段之一。
RAPD与PCR、RFLP、DNA指纹图技术相比,它有如下特点:①RAPD 技术可在对受试物种缺乏任何分子生物学研究背景下,直接对基因组进行多态性分析。②操作简单;一次 RAPD扩增实际就是一次简单的PCR反应,适合大量的样本快速分析。③所需模板DNA量极少; 一般一次扩增只需10-50ngDNA,这对于濒危动植物的基因组分析是十分有效的[27、29-31]。④与RFLP相比,RAPD可免去探针克隆与分离过程,不需进行DNA序列分析。⑤RAPD同时适用于基因组的单拷贝区域或重复序列区。
RAPD在植物抗污染进化研究中具有重大推动作用。利用RAPD 分析矿区不同重金属污染历史下作物DNA结构多样性,从中可试图找到对重金属污染具有抗性的DNA片段或基因组。这些研究虽然在国内外刚刚起步,但这些工作直接从分子水平上分析污染条件下种群遗传结构上的分化进化,在理论上具有广阔的研究前景和意义。2.5 核酸序列测定
核酸序列测定包括DNA和RNA序列的测定。由于rRNA基因较保守,因此分子生物学中更重视rRNA基因的测定。在植物抗污染进化研究中主要运用叶绿体4.5SrRNA、5SrRNA 及胞质5SrRNA基因,然而,核酸序列的测定在植物抗性分化进化研究中尚未见报导, 此项技术在实际操作和运用上还有待于进一步完善。3 结语
近二三十年来分子生物学技术迅速成熟为植物抗污染进化研究提供了极为重要的研究工具和手段,为传统的抗性研究打开了新的局面。同时,植物抗性进化研究为生态遗传学、进化生态学以及作物选择育种提供了背景材料和研究窗口。目前,分子生物学技术在抗性进化研究中的应用刚刚起步,有待于深入和发展。与此同时,我们也应清醒的认识到微观技术研究有其自身的局限性,因此我们应站在宏观进化生态学高度在理论、方向上进行指导,只有宏观与微观有机地结合起来,植物抗性进化研究才可能有更大的突破。(完,空心雨论文网)
